Занятие Тема: «Санитарно-бактериологическое исследование воды»

Тема: «Санитарно-бактериологическое

исследование воды»

I План занятия

1.Изучить санитарно-бактериологические показатели, используемые для санитарно-бактериологической оценки питьевой воды.

2.Овладеть методикой проведения санитарно-бактериологического исследования питьевой воды.

3.Научиться производить учет, оценку и оформление результатов исследований.

IIСамостоятельная работа

Задание 1

Изучить санитарно-бактериологические показатели, используемые для санитарно-бактериологической оценки питьевой воды, её нормативные показатели.

При исследовании микробиологических показателей качества питьевой воды в каждой пробе проводится определение следующих показателей.

1. Общее микробное число в 1см³ – норматив по НД (СанПиН 10-124 РБ 99) – не более 50.

2. Общие колиформные и термотолерантные бактерии в 100см³– норматив по НД отсутствие в 100см³ .

Примечание: Порядок исследования других нормируемых микробиологических показателей, представленных в таблице 1 СанПиН 10-124 РБ 99, определяется при составлении рабочей программы производственного контроля качества питьевой воды, а именно:

- определение колифагов и цист лямблий проводится в системах водоснабжения из поверхностных и подземных источников перед подачей воды в распределительную сеть, а колифаги – еще и в сети;

- определение спор сульфитредуцирующих клостридий проводится при оценке эффективности технологии обработки воды.

Таблица 1

Задание 2

Приготовьте питательные среды:

1. Скошенный СПА: расплавьте стерильный СПА во флаконе на водяной бане, охладите до 50⁰С и разлейте в стерильные пробирки, которые скосите, пользуясь ШСА.

2. Среду Эндо: в количестве 100мл по прописи на этикетке и разлейте в чашки Петри.

3. Лактозо -пептонную (глюкозо-пептонную среду).

Способ приготовления: 10г пептона, 5г натрия хлористого, 5г лактозы (глюкозы) растворяют при нагревании в 1л дистиллированной воды. После растворения ингредиентов устанавливают рН (7,4-7,6), разливают по 10 мл в пробирки, стерилизуют при (112+/-2)⁰С 12 мин. Для приготовления концентрированной лактозо-пептонной (глюкозо-пептонной) среды все ингредиенты, кроме воды, увеличивают в 10раз, разливают по 1мл в пробирки и по 10мл во флаконы.

4. Полужидкие среды Гисса с лактозой, маннитом (глюкозой)в количестве 25мл каждой по прописи на этикетке и разлейте в пробирки столбиком (2-2,5см).

Задание 3

Произведите отбор пробы воды централизованного водоснабжения для микробиологического исследования.

Алгоритм

отбора проб воды и подготовка ее к исследованию

1. Водопроводный кран стерилизуют обжиганием и спускают воду не менее 10минут при полностью открытом кране. При отборе пробы напор может быть уменьшен.

2. Пробу отбирают непосредственно из крана в стерильную емкость с плотно закрывающейся пробкой (силиконовой, резиновой) с защитным колпачком (из алюминиевой фольги, плотной бумаги) с соблюдением стерильности. Емкость открывают непосредственно перед отбором, удаляя пробку вместе со стерильным колпачком. Во время отбора пробка и края емкости не должны чего-либо касаться. Ополаскивать посуду запрещается. После наполнения емкость закрывают стерильной пробкой и колпачком.

3. Отобранную пробу маркируют и сопровождают актом отбора проб воды с указанием места, даты, времени забора и другой информации.

Примечание:

Доставка проб осуществляется в контейнерах- холодильниках при температуре +4 - +10⁰С. При соблюдении указанных условий срок начала исследований от момента

отбора проб не должен превышать 6 часов. Если пробы нельзя охладить, их анализ следует провести в течение 2-х часов после забора.

Задание 4

Проведите определение общего числа микроорганизмов, образующих колонии на питательном агаре, учтите результат и сделайте заключение.

Определение понятия показателя.

Метод определяет в питьевой воде общее число мезофильных аэробных и факультативных анаэробных микроорганизмов (ОМЧ), способных образовывать колонии на питательном агаре при температуре 37⁰С в течение 24часов, видимые с увеличением в 2 раза.

Алгоритм

определения общего числа микроорганизмов в питьевой воде

1. Из каждой пробы должен быть сделан посев не менее двух объемов по 1 мл.

2. После тщательного перемешивания пробы воды вносят по 1 мл в стерильные чашки Петри, слегка приоткрывая крышки.

3. Сразу же после внесения воды в каждую чашку вливают 6-8 см расплавленного и остуженного до 45⁰С питательного агара после фламбирования края посуды, в которой он содержится.

4. Затем быстро смешивают содержимое чашек, равномерно распределяя по всему дну, избегая образования пузырьков воздуха, попадания агара на края и крышку чашки. Эту процедуру производят на горизонтальной поверхности, где чашки оставляют до застывания агара.

5. После застывания агара чашки с посевами помещают в термостат вверх дном и инкубируют при температуре (37+/-1) ⁰С в течение 24+/-2 часов.

6. Учет результатов:

Должны быть подсчитаны все выросшие на чашке колонии, наблюдаемые при увеличении в 2 раза. Подсчет следует производить только на тех чашках, на которых выросло не более 300 изолированных колоний. Подсчитанное количество колоний на каждой чашке суммируют и делят на два. Результат выражают числом колоний образующих единиц (КОЕ) в 1мл исследуемой пробы и заносят в протокол. Если подсчет колоний на чашках невозможен, то в протоколе отмечают: «сливной рост».

Полученные результаты:

На 1-ой чашке выросло _______колоний

На 2-ой чашке выросло _______колоний

КОЕ=

Заключение:

«Проба воды питьевой из водопровода по КОЕ________________требованиям СанПиН 10-124 РБ 99».

Задание 5

Проведите определение общих и термотолерантных колиформные бактерий методом мембранной фильтрации, учтите результаты и сделайте заключение.

Определение понятия показателя

К общим колиформным бактериям относятся грам -, не образующие спор палочки, не обладающие оксидазной активностью, ферментирующие лактозу или маннит с образованием альдегида, кислоты и газа при температуре 37⁰С в течение 24часов.

Термотолерантные колиформные бактерии обладают всеми признаками общих колиформных бактерий, которые кроме того способны ферментировать лактозу до кислоты и газа при температуре 44⁰С в течение 24-х часов.

Алгоритм

определения общих и термотолерантных колиформных бактерий

методом мембранной фильтрации

1. При исследовании воды на выходе с водопроводных сооружений

и в распределительной сети необходимо анализировать 3 объема по 100мл. Если анализируемая вода стабильно соответствует нормативам, то допустима фильтрация 300мл воды через один фильтр.

2. Фильтровальный аппарат обтирают ватным тампоном, смоченным спиртом ректифицированным, и фламбируют.

3. После охлаждения на нижнюю часть фильтровального аппарата (столик) кладут фламбированным пинцетом стерильный мембранный фильтр, прижимают его верхней частью прибора (стаканом, воронкой) и закрепляют устройством, предусмотренным конструкцией прибора.

4. В верхнюю часть прибора для фильтрования наливают точно отмеренный объем воды, затем создают вакуум в нижней части прибора.

5. После окончания фильтрования воронку снимают, фильтр осторожно приподнимают за край фламбированным пинцетом при сохранении вакуума для удаления излишка воды на нижней стороне фильтра, а затем переносят его, не переворачивая, на питательную среду Эндо, разлитую в чашки Петри, избегая пузырьков воздуха между средой и фильтром. Поверхность фильтра с оседавшими на ней бактериями должна быть обращена вверх.

6. Под каждым фильтром на дне чашки делают надпись с указанием объема профильтрованной воды, даты посева и номера пробы. На одну чашку можно поместить 3-4 фильтра с условием, чтобы фильтры не соприкасались.

7. Чашки с фильтрами ставят в термостат дном вверх и инкубируют посевы при температуре (37+/-1) ⁰С в течение 24+/-2 часов.

8. Учет результатов

Результат считается отрицательным, если на фильтрах вообще не выросли колонии, или выросли колонии с неровными краями и поверхностью (пленчатые, губчатые, плесневые, прозрачные, слизистые).

9. При наличии типичных лактозоположительных колоний, дающих отпечаток на обратной стороне мембранного фильтра и среде – темно-красных, красных с металлическим блеском и без него, выпуклых с красным центром и других оттенков, а также лактозоотрицательных – розовых без отпечатков, подсчитывают число колоний каждого типа.

10. Для идентификации отбирают не менее 5 колоний каждого вида, делают их посев на скошенный СПА, либо на чашки секторами, инкубируют при температуре (37+/-1) ⁰С в течение 16-18 часов. При росте колоний одного вида исследуют не менее 10 колоний.

11. Все дальнейшие биохимические тесты проводят только с чистыми субкультурами.

12. В качестве подтверждающих тестов используют оксидазный тест и тест образования кислоты и газа при ферментации лактозы или манита (глюкозы).

13. Для определения оксидазной активности заранее приготовленные бумажки для оксидазного теста смачивают дистиллированной водой.

Стеклянной палочкойпомещают мазок свежей культуры со скошенного СПА на подготовленную бумагу. Реакция считается положительной, если в течение 10-30 секунд появляется фиолетово – коричневое или синее окрашивание. Более позднюю реакцию не учитывают. Культуры, давшие оксидазоположительные реакции, дальнейшему исследованию не подлежат.

14. Все типичные лактозоположительные колонии засевают параллельно в две пробирки с одной из лактозных сред.

Для определения общих колиформных бактерий посев инкубируют при температуре (37+/-1) ⁰С в течение 24+/-2 часов.

Для определения термотолерантных бактерий посев производят в среду, предварительно прогретую до температуры 44⁰С, и инкубируют при температуре (44+/-0,5) ⁰С в течение 24+/-2часов.

15. Нетипичные колонии (лактозоотрицательные) пересевают в подтверждающем тесте со средой с маннитом (глюкозой) и инкубируют посевы при температуре (37+/-1) ⁰С в течение 24+/-2 часов.

16. Колонии учитывают как общие колиформные бактерии при отрицательном оксидазном тесте, ферментации лактозы или маннита (глюкозы) при температуре (37+/-1) ⁰С с образованием кислоты и газа.

Среди этих колоний учитывают как термотолерантные колиформные бактерии при отрицательном оксидазном тесте и ферментации лактозы при температуре 44+/-0,5) ⁰С с образованием кислоты и газа.

17. Результат анализа выражают числом колоний образующих единиц (КОЕ) общих колиформных бактерий в 100 мл воды.

Для подсчета результата суммируют число колоний, подтвержденных как общиеколиформные бактерии, выросших на всех фильтрах, и делят на 3.

При отсутствии общих колиформных бактерий на всех фильтрах результат записывают как «не обнаружено КОЕ в 100 мл».

Вычисления и оформление результатов в протоколе определения термотолерантных колиформных бактерий проводят аналогично.

Полученные результаты:

При посеве 3-х фильтров по 100мл

Заключение: « Проба воды питьевой из водопровода_по определению общих и термотолерантных колиформных бактерий

_____________________требованиям СанПиН 10124 РБ 99».

Заключение о результатах испытаний: « Образец (проба) продукции: Вода питьевая из водопровода прошла (не прошла) испытания на соответствие требованиям: Сан ПиН 10-124 РБ 99 – по микробиологическим показателям.

Задание 6

Сделайте первичный посев для определения общих и термотолерантных колиформных бактерий титрационным методом.

Алгоритм определения общих и термотолерантных колиформных бактерий титрационным методом

1. Производят посев: 3 объемов по 100 мл, 3 объемов по 10 мл, 3 объемов по 1мл. Посев 100 мл и 10 мл воды производят в 10 и 1 мл концентрированной

лактозо - пептонной среды, посев 1мл пробы проводят в 10 мл среды обычной концентрации.

2. Посев инкубируют при температуре (37+/-1) ⁰С в течение 18-24часов.

3. Из емкости, где отмечено помутнение и образование газа или только помутнение делают высев на сектора среды Эндо. Посевы на среде Эндо инкубируют при температуре (37+/-1)⁰С в течение 18-24часов.

4. Идентификацию колоний проводят по культуральным и биохимическим тестам аналогично методу мембранной фильтрации.

5. Вычисление результатов

После определения положительных и отрицательных результатов на наличие общих и термотолерантных колиформных бактерий в объемах воды, посеянных в среду накопления, вычисляют наиболее вероятное число бактерий в 100мл пробы по таблице 1 МУК 4.2.671 – 97

Заключение:

Оценка________

Подпись преподавателя____________