Главная Контакты В избранное
  • Занятие Тема: «Методы исследования отделяемого из верхних и нижних отделов дыхательных путей».

    АвторАвтор: student  Опубликовано: 4-12-2020, 20:17  Комментариев: (0)


    Тема: «Методы исследования отделяемого из верхних и нижних отделов дыхательных путей».

    I План занятия

    1. Изучить этиологические агенты инфекций верхних дыхательных путей.

    2. Изучить правила забора, хранения и транспортировки исследуемого материала.

    3. Освоить методику выделения и идентификации предполагаемых возбудителей из биологическогоматериала.

    II. Самостоятельная работа

    Задание 1

    Изучите этиологические агенты инфекций верхних дыхательных путей.

    Инфекции дыхательных путей протекают в виде бронхита, пневмонии, абсцесса и гангрены легкого, эмпиемы плевры. Ведущее место в данной группе болезней занимают острый и хронический бронхиты.

    Заражение возбудителями оппортунистических инфекций происходит воздушно-капельным путем. В некоторых случаях возбудители проникают из крови (при оперативных вмешательствах, эндоскопических исследованиях, во время интратрахеального введения аэрозолей и растворов.

    Занос условно-патогенных возбудителей в дыхательные пути необязательно приводит к развитию инфекции. У здоровых людей бронхи обладают выраженной способностью к самоочищению. Кроме того, слизистая оболочка респираторного тракта обладает выраженными барьерными функциями против условно-патогенных бактерий. Поэтому для возникновения инфекции необходима высокая инфицирующая доза возбудителя, нарушение целостности слизистой и снижение самоочищающей функции дыхательных путей. Риск возникновения инфекции повышают иммунодефицитные состояния.

    В ряде случаев первичными этиологическими агентами могут быть стрептококки пневмонии, бактерии инфлюэнцы и др. К вирусной инфекции может присоединиться вторичная бактериальная, микоплазменная, реже грибковая инфекция, в результате чего процесс приобретает гнойный характер. В качестве возбудителей вторичных инфекционных агентов чаще встречаются St. aureus, H. influencae, St. epidermidis, E. сoli, Kl. pneumoniae и др.

    Хронический бронхит в начальной стадии протекает как неинфекционное заболевание, которое в последующем переходит в инфекционный процесс, вызванный стрептококками пневмонии, бактериями инфлюэнцы, стафилококками золотистым и эпидермальным, кишечной палочкой, клебсиеллами пневмонии, протеями, синегнойной палочкой, пиогенным стрептококком, нейссериями, энтеробактером, бактероидами, фузобактериями, пептострептококками, кандидами и др.

    Острая пневмония чаще всего вызывается Str. pneumoniae в монокультуре или в ассоциации с золотистым или эпидермальным стафилококком и грамотрицательными бактериями. Около 10-30% пневмоний у детей – вирусами и микоплазмами, а у взрослых – L. рneumophila (болезнь легионеров). Хроническая пневмония имеет полимикробную этиологию.

    Окончательный диагноз устанавливают путем проведения бактериологического исследования с целью выделения чистой культуры (культур) возбудителя. Этиологически значимыми для мокроты и промывных вод бронхов являются следующие минимальные концентрации возбудителей: для стрептококков – 106 КОЕ / мл; стафилококков – 105, энтеробактерий и грамотрицательных неферментирующих бактерий – 104, Candida albicans– 103.

    У этиологически значимых культур определяют чувствительность к препаратам. Поскольку в процессе болезни часто наблюдается смена видового состава возбудителей, то каждые 5-7 дней исследование повторяют.

    Задание 2

    Изучите правила забора, хранения и транспортировки исследуемого материала.

    Общие требования.

    1. Биоматериал должен отбираться:

    · до начала антибиотикотерапии терапии или перед введением следующей дозы антибиотика с учетом времени его элиминации;

    · непосредственно из очага инфекций либо биопробы, отражающих процесс в тех или иных органах и системах (бронхиальный секрет при пневмониях, моча при инфекциях МВП и др.);

    · с соблюдением асептики, избегая контаминации посторонней флорой;

    · в достаточном количестве для проведения исследования и помещаться в стерильную посуду.

    2. Доставляться в максимально короткие сроки (1,5-2 часа либо с применением транспортных сред).

    3. Необходимо правильно заполнять сопроводительные документы (направления).

    ОТДЕЛЯЕМОЕ ИЗ ВЕРХНИХ ДЫХАТЕЛЬНЫХ ПУТЕЙ

    Показания для проведения микробиологического исследования:

    ·воспалительные заболевания верхних дыхательных путей;

    ·диагностика инфекционных заболеваний: пневмококковой инфекции, скарлатины;

    ·диагностика бактерионосительства при стафилококковой инфекциях.

     

     

    Взятие исследуемого материала.

    Материал из носовых ходов забирают с помощью сухого стерильного тампона, а из зева - с помощью увлажненного стерильного ватного тампона (0,9 % раствор NaCl). Мазки из носа и глотки берут разными тампонами. Материал из глотки и с миндалин следует забирать натощак или не ранее, чем через 3-4 часа после еды. При взятии мазков с задней стенки глотки и миндалин нельзя касаться тампоном языка, слизистой щек,зубов.

    Материал должен быть доставлен в лабораторию в течение 2 часов. При использовании транспортной среды (сахарного бульона) время доставки увеличивается до 24 часов. В холодное время года отобранный материал следует оберегать от охлаждения.

    Для обследования на стафилококковое бактерионосительство материал забирают из двух носовых ходов сухим ватным тампоном и сразу же засевают на питательные среды.

    Оценка диагностической значимости полученных результатов.

    Оценка этиологической значимости отдельных видов микроорганизмов осложняется обилием нормальной микрофлоры и широким распространением бактерионосительства. Нормальная микрофлора полости рта и глотки характеризуется высокой степенью разнообразия и включает Streptococcus spp., Neisseriaspp., Staphylococcus spp., Corynebacterium spp., Lactobacillus spp., Candida spp., и др. У лиц преклонного возраста и у людей с иммунодефицитами в ротоглотке возрастает количество грамотрицательных микроорганизмов, включая Escherichia coli, Klebsiella spp., Acinetobacter spp., Pseudomonas spp. и др. Широко распространено и бактерионосительство патогенных бактерий.

    Среди инфекций бактериальной этиологии лидирующее положение занимают ангины. В этиологии бактериальных ангин ведущая роль принадлежит стрептококкам группы А: почти в 80% случаев ангины бактериальной этиологии вызывают Streptococcus pyogenes, 17,8% - стафилококки (самостоятельно или в ассоциации со стрептококками).

    ОТДЕЛЯЕМОЕ ИЗ НИЖНИХ ОТДЕЛОВ ДЫХАТЕЛЬНЫХ ПУТЕЙ

    Показания для проведения микробиологического исследования:

    ·воспалительные заболевания нижних отделов дыхательных путей.

    Взятие исследуемого материала.

    Материалы, исследуемые при инфекциях нижних дыхательных путей:

    ·мокрота (наиболее доступный материал, часто с неоднозначной трактовкой результатов);

    ·плевральная жидкость;

    ·трахеобронхиальные смывы (часто значительное разведение материала снижает возможность выделения микроорганизмов);

    ·пунктат инфильтрата, абсцесса;

    ·браш-биоптат (из глубины бронхов специальной канюлей с защитными щеточками)- наиболее достоверный результат.

    Перед сбором мокроты больному предлагают почистить зубы и прополоскать рот кипяченой водой. Предпочтительным является исследование утренней порции мокроты. Мокроту собирают в стерильную широкогорлую банку.

    Исследование промывных вод бронхов проводят при отсутствии или скудности мокроты. Это связано не только с технической сложностью взятия этого вида материала, но и с меньшей диагностической ценностью результата, из-за его значительного разбавления (концентрация микроорганизмов в промывных водах в 10-1000 раз меньше, чем в мокроте). Бронхиальные смывы могут быть получены при бронхоскопии. В этом случае не рекомендуется вводить в бронх более 5 мл физиологического раствора.

    Оценка диагностической значимости полученных результатов.

    Причины, препятствующие установлению этиологического диагноза бактериальной пневмонии:

    ·отсутствие мокроты, особенно в ранние сроки заболевания (у 10-30% больных) и трудности ее получения у детей;

    ·невозможность получения материала инвазивными методами;

    ·контаминация бронхиального содержимого микрофлорой верхних дыхательных путей и ротоглотки (до 40% больных);

    ·применение антибиотиков на догоспитальном этапе (15-30% больных)

    ·высокий уровень носительства пневмотропных патогенов.

    При воспалительных процессах дыхательных путей, когда высеваются условно-патогенные микроорганизмы (стафилококки, стрептококки и др.) интерпретация полученных результатов представляет определенные трудности. Следует учитывать, что наличие или отсутствие в исследуемом материале микроорганизмов не может иметь решающего значения для постановки диагноза.

    Особое значение принадлежит количественной оценке роста различных видов микроорганизмов, выросших при первичном посеве на плотных питательных средах. Для ориентировочной оценки количественного роста микроорганизмов в ассоциации целесообразно пользоваться следующими критериями:

    I степень - очень скудный рост - рост единичных колоний (до 10);

    II степень - скудный рост - рост 10 - 25 колоний;

    III степень - умеренный рост - рост множества сосчитываемых колоний (не менее 50);

    IV степень - обильный рост - сплошной рост не сосчитываемыхколоний.

    I и II степени роста свидетельствуют в пользу загрязнения или носительства, а III и IV - в пользу этиологической значимости данного микроорганизма.

    Задание 3

    Приготовьте мазок из исследуемого материала (мокроты), окрасьте по методу Грама- Синева, изучите под микроскопом, зарисуйте его в дневник и сделайте заключение.

     

    Заключение:

    Задание 4

    Приготовьте питательные среды для выделения предполагаемых возбудителей (с учетом данных предварительной микроскопии биоматериала):

    1.

    2.

    3.

    Задание 5

    Проведите первичные посевы исследуемого материала (взвесь мокроты в СПБ) на приготовленные питательные среды с целью выделения Str. pneumoniae:

    1.1-2 капли взвеси посейте на чашку Петри с 20% сывороточным агаром (шпателем) ->370С 24 часа.

    2.1-2 капли взвеси посейте на чашку Петри с 5% кровяным агаром (шпателем) ->370С 24 часа.

    3.1-2 капли взвеси посейте в пробирку с 20% сывороточным бульоном

    4.->370С 24 часа.

    Задание 6

    1. Отберите на чашке Петри с кровяным (сывороточным) агаром изолированную типичную для Str. pneumoniaeколонию.

    2. Сделайте из части колонии мазок, окрасьте по методу Грама-Синева, изучите под микроскопом, зарисуйте его в дневник и сделайте заключение.

    3. 3.Оставшуюся часть изученной колонии пересейте наскошенный сывороточный агар для выделения и накопления чистой культуры ->370С 24 часа.

     

     

    Заключение:

     

    Задание 7

    При микроскопии мазка, приготовленного со скошенного сывороточного агара, выявлены бескапсульные ланцетовидные диплококки грамположительные.

    Сделайте предварительное заключение и наметьте ход дальнейшего бактериологического исследования для окончательной идентификации выделенной культуры.

     

    Заключение:

    Алгоритм дальнейшего бактериологического исследования:

    1.

    2.

     

    3.

     

     

    4.

     

     

    5.

     

     

    6.

    Задание 8

    Проведите посевыразведений мокроты на приготовленные питательные среды, пользуясь схемой микробиологического исследования на дисбактериоз, и поместите их в термостат согласно режимов инкубации.

    Схема микробиологического исследования (мокроты)верхних и нижних отделов дыхательных путей.

    ( первичные посевы)

    Бактерии

    Питательные среды

    Засеваемиый объем

    Режим инкубации

    1

    Грам- катаральные микрококки, фарингиальные диплококки

    20% сывороточный агар

    По 0,1 мл

    37ºC, 24часа

    2

    Дифтероиды и другие коринобактерии

    Бучина

    По 0,1 мл

    37ºC, 24часа

    (или 48 часов)

    3

    Капсульные грам- палочки и другие энтеробактерии

    Эндо, Плоскирева

    По 0,1 мл

    37ºC, 24часа

    4

    Актиномицеты, грибы

    Сабуро( агар) с

    По 0,1 мл

    22ºC, 48часов

    ( до 72 часов)

    5

    Стафилококки

    ЖСА

    По 0,1 мл

    37ºC, 48часов

    6

    Гемолитический стрептококк, пневмококк, возбудитель инфлюэнцы, кишечная палочка с гемолитическими свойствами

    5% кровяной агар

    По 0,1 мл

    37ºC, 24часа

    7

    Псевдомонады

    СПА

    По 0,1 мл

    37ºC, 24часа

    8

    Виды Proteus

    Скошенный СПА

    ( по Шукевичу)

    По 0,1 мл

    37ºC, 24часа

    9

    Пептококки, бактероиды и другие анаэробы

    Китта-Тароцци

    По 0,1 мл

    37ºC, 24часа

    Оценка результатов.

    Количественная оценкароста различных видов микроорганизмов,выросших при первичном посеве на питательных средах.Количественный метод обеспечиваетвыделение чистых культур микроорганизмов и даетвозможность судить болееточно об этиологической значимости выделенных микроорганизмов.

     

    Оценка___________

    Подпись преподавателя ______________

     

     

     

     

     

     

    скачать dle 10.6фильмы бесплатно