Тема: «Методы исследования отделяемого глаз и ушей».

I План занятия

1.Изучить этиологию гнойно-воспалительных заболеваний глаз и ушей.

2.Изучить правила забора, хранения и транспортировки исследуемого материала.

3.Освоить методику выделения и идентификации предполагаемых возбудителей из биологическогоматериала.

Задание 1

Изучите этиологию гнойно-воспалительных заболеваний глаз и ушей.

Микробиологическое исследование проводится при заболеваниях конъюнктивы, век, слезных мешков, роговицы. Следует учитывать, что в норме только с конъюнктивы и в небольшом количестве регулярно выделяются Staphylococcus epidermidis, Corynebacterium xerosis, Corynebacterium pseudodiphteriticum, непатогенные микроорганизмы семейства Neisseriaceae, Sarcina. У отдельных лиц временно могут выделяться Staphylococcus aureus, микроорганизмы семейства Streptococcaceae (S. pneumoniae, S. feacalis, S. viridans), представители семейства Enterobacteriaceae, рода Haemophilus, микоплазмы.

Причиной конъюнктивитов в преобладающем количестве случаев являются стафилококки (Staphylococcus aureus чаще обнаруживается при остром, а Staphylococcus epidermidis - хроническом конъюнктивите). Другими возбудителями острых гнойных и хронических конъюнктивитов являются Neisseria gonorrhoeae, Moraxella lacunata, Branhamella catarrhalis, Corynebacterium diphteriae, Streptococcus pyogenes, Streptococcus viridans, Streptococcus faecalis, Haemophilus aegypticus, Haemophilus influenzae, Pseudomonas aeruginosa, микроорганизмы семейств Enterobacteriaceae, родов Proteus, Klebsiella, Escherichia. Реже встречаются Listeria monocytogenes, грибы рода Candida, Aspergillus.

При воспалительных заболеваниях наружного, среднего и внутреннего уха исследуют гнойное или серозное отделяемое. При этом следует учитывать, что в норме в наружном ухе, слуховом проходе присутствует нормальная микрофлора, представленная сапрофитными и условно - патогенными бактериями - обитателями кожи. Это Staphylococcus epidermidis, Corynebacterium pseudodiphtheriticum. В среднем и внутреннем ухе микрофлора отсутствует. При остром воспалительном процессе возбудителем может быть Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Streptococcus pyogenes, Streptococcus viridans, Streptococcus pneumoniae, а также Haemophilus influenzae, E. coli, C. diphtheriae, Bacteroides. При хронически протекающей инфекции чаще обнаруживают ассоциации грамотрицательных микроорганизмов рода Proteus, Klebsiella, Enterobacter, Escherichia, Pseudomonas, а также Mycobacterium tuberculosis, Actinomyces и плесневые грибы Aspergillus, Mucor.

Задание 2

Изучите правила забора, хранения и транспортировки исследуемого материала при гнойно-воспалительных заболеваниях различных органов и тканей по «Рекомендациям по забору материала на бактериологические исследования», разработанным ГОЦГЭ и ОЗ.

Общие требования.

1. Биоматериал должен отбираться:

·до начала антибиотикотерапии терапии или перед введением следующей дозы антибиотика с учетом времени его элиминации;

·непосредственно из очага инфекций либо биопробы, отражающих процесс в тех или иных органах и системах (бронхиальный секрет при пневмониях, моча при инфекциях МВП и др.);

·с соблюдением асептики, избегая контаминации посторонней флорой;

·в достаточном количестве для проведения исследования и помещаться в стерильную посуду.

2. Доставляться в максимально короткие сроки (1,5-2 часа либо с применением транспортных сред).

3. Необходимо правильно заполнять сопроводительные документы (направления).

ОТДЕЛЯЕМОЕГЛАЗ

Показания для проведения микробиологического исследования:

·воспалительные заболевания конъюнктивы, век, слезных мешков, роговицы.

Взятие исследуемого материала.

Взятие материала осуществляется врачом-окулистом, не ранее чем через 5-6 часов после приема медикаментов и процедур с соблюдением правил асептики. С конъюнктивы материал берут прожженной и остуженной бактериологической петлей или стерильной стеклянной палочкой. Веки необходимо придерживать руками во избежание касания тампона ресницами. При обильном гнойном отделяемом можно использовать ватный тампон, которым берут гной с внутренней поверхности нижнего века движением к внутреннему углу глазной щели. При блефарите гнойные корочки снимают пинцетом и забирают отделяемое из язвочек у основания ресниц. Материал с роговицы берут проволочной петлей или другим подходящим инструментом после обезболивания 0,1% раствором дикаина. При эндофтальмите проводят пункцию глаза. Объем отбираемого внутриглазного содержимого - 0,3-0,5 мл.

Материал должен быть доставлен в лабораторию немедленно. Хранение образцов допускается только в крайнем случае на протяжении не более 2 часов. При использовании транспортных сред (сахарного бульона) время доставки увеличивается до 24 часов.

Оценка диагностической значимости полученных результатов.

Интерпретация результатов проводится с учетом данных анамнеза, клинических проявления заболевания и видов выделенных микроорганизмов. Следует учитывать, что в норме только с конъюнктивы и в небольшом количестве регулярно выделяются Staphylococcus epidermidis, Corynebacterium xerosis, Corynebacterium pseudodiphteriticum, непатогенные микроорганизмы семейства Neisseriaceae, Sarcina.

Наиболее частой причиной конъюнктивитов бактериальной этиологии являются стафилококки (при остром конъюнктивите чаще всего обнаруживается Staphylococcus aureus, при хроническом - Staphylococcus epidermidis). Золотистый стафилококк, кроме того, поражает и другие отделы глаза. У новорожденных один штамм стафилококков часто вызывает одновременно заболевания глаз, полости рта, пупка, носа.

Энтеробактерии (Klebsiella spp., Proteus spp., Escherichia coli),а также синегнойные палочки - возможная причина конъюнктивитов, как у взрослых, так и у новорожденных. У взрослых конъюнктивиты этой этиологии развиваются, как правило, после химического или механического повреждения конъюнктивы, а у новорожденных - при инфицировании во время родов.

На фоне длительной антибиотикотерапии может иметь место заселение конъюнктивы глаза грибами Candida и Aspergillus.

На бактериальные инфекции приходится 12,9% различных форм патологии роговицы. Факторами, предрасполагающими к возникновению бактериальных кератитов, являются травматические поражения глаз, в том числе, связанные с ношением контактных линз, длительное течение герпетических кератитов, дистрофий роговицы и обусловленное этим применение антибиотиков и кортикостероидов, а также очаги хронической инфекции. Чаще всего развитие бактериальных кератитов обусловлено микроорганизмами из родов Staphylococcus, Streptococcus, Pseudomonas. При этом наиболее тяжелые поражения с образованием язв вызывают Pseudomonas aeruginosa. Реже причиной кератитов являются грамотрицательные микроорганизмы из родов Escherichia, Neisseria, Proteus, Moraxella.

Причиной эндофтальмитов, хориоретинитов наиболее часто являются Staphylococcus aureus (50%), Pseudomonas aeruginosa, реже - Entero­bac­teria­ceae spp. Вялотекущие хронические эндофтальмиты могут быть обусловлены Propionobacterium acnes, а эндофтальмиты у наркоманов, внутривенно вводящих героин - Bacillus cereus.

Развитие дакриоцититов может быть обусловлено Streptococcus pneumoniae, Staphylococcus aureus, Haemophilus influenzae.

ОТДЕЛЯЕМОЕ УШЕЙ

Показания для проведения микробиологического исследования:

·воспалительные заболевания наружного, среднего и внутреннего уха.

Взятие исследуемого материала.

При поражении наружного уха проводят обработку кожи 70^о спиртом с последующим промыванием физиологическим раствором, затем отделяемое из очага собирают на стерильный ватный тампон. При поражениях среднего и внутреннего уха исследуют пунктаты и материал, полученный во время оперативных вмешательств, собранный в стерильную посуду.

Материал должен быть доставлен в лабораторию немедленно. Хранение образцов допускается только в крайнем случае на протяжении не более 2 часов. При использовании транспортных сред (сахарного бульона) время доставки увеличивается до 24 часов.

Оценка диагностической значимости полученных результатов.

Следует учитывать, что в норме в наружном ухе, слуховом проходе присутствуют нормальная микрофлора, представленная сапрофитными и условно-патогенными бактериями (обитателями кожи такими как стафилококки, бактероиды, энтеробактерии, псевдомонады). При остром воспалительном процессе возбудителем может быть Staphylococcus aureus, Staphylococcus еpidermidis,Streptococcus pyogenes, Streptococcus viridans, Streptococcus pneumoniae, а также Haemophilus influenzae, Escherichia coli, Corynebacterium diphtheriae, Bacteroides. При хронически протекающей инфекции чаще обнаруживают ассоциации грамотрицательных микроорганизмов рода Proteus,Klebsiella, Enterobacter,Escherichia, Pseudomonas, а также плесневые грибы.

Задание № 3

Приготовьте питательные среды:

1. 5% кровяной агар: к расплавленному и охлажденному до 45ºC агару прибавляют 5% дефибринированной крови перемешивают и разливают в чашки Петри, предварительно подогретые в термостате.

2. Агар Сабуро во флаконе расплавьте на водяной бане, охладите до 45-50⁰С и

разлейте в чашки Петри.

3. 0,1 полужидкий сывороточный агар в объеме 50 мл и разлейте пробирки столбиком по 2-3 мл.

4. СПА во флаконе расплавьте на водяной бане, охладите до 45-50⁰С и разлейте в пробирки, которые скосите, пользуясь ШСА.

5. Среды Гисса с Л, Гл, Мн, М, С в объеме 50 мл каждой и разлейте пробирки столбиком по 2-3 мл.

6. АГВ во флаконе расплавьте на водяной бане, охладите до 45-50⁰С и

разлейте в чашки Петри.

Задание № 4

Приготовьте два мазка - отпечатка с помощью тампонаиз исследуемого материала (отделяемого конъюктивы или наружного уха) на двух предметных стеклах, высушите на воздухе, зафиксируйте над пламенем спиртовки и окрасьте один мазок по методу Грама - Синева, второй - при подозрении на туберкулез – по Цилю – Нильсену, изучите под микроскопом, зарисуйте в дневник и сделайте предварительное заключение.

Заключение: Заключение:

Задание № 5

1. Проведите бактериоскопию исследуемого материала (отделяемого конъюктивы или наружного уха) при подозрении на грибы рода Candidaметодом «раздавленная капля».

Алгоритм приготовления препарата «раздавленная капля»:

1. Исследуемый материал помещают на предметное стекло в каплю физиологического раствора и покровным стеклом осторожно накрывают так, чтобы жидкость была без пузырьков воздуха.

2. Правильно сделанная капля заполняет все пространство между покровным и предметным стеклом, но при этом жидкость не выступает за края покровного стекла.

3. Микроскопию проводят при опущенном конденсоре сначала при малом увеличении (объектив х8), затем при большом (объектив х40).

3. Изучите препарат в темном поле зрения, зарисуйте в дневник и сделайте заключение.

Заключение:

Задание № 6

1. Проведите первичные посевы исследуемого материала (отделяемого конъюктивы или наружного уха)на 5% кровяной агар тампоном на четыре сектора и исследуемый материал на этом же тампоне засейте на среду обогащения, опустив тампон с материалом в пробирку со средой (0,1 полужидкий сывороточный агар) для установления возбудителя гнойной инфекции, на агар Сабуро тампоном на два сектора - при подозрении на грибы. 5% кровяной агар инкубируют при 35-37⁰С , 5-10% СО₂ - в эксикаторе со свечой в течение 24- 48 часов, агар Сабуро при 22-25⁰С в течение 72 часов, 0,1 полужидкий сывороточный агар при 35-37⁰С в течение 48 часов. При наличии роста в жидких средах, производят высев на кровяной агар.

Задание № 7

1. Проведите изучение колонии, выделенной на кровяном агаре, приготовьте мазок, окрасьте по методу Грама - Синева, изучите под микроскопом, зарисуйте мазок в дневник и сделайте заключение.

Заключение:

2. Оставшуюся часть колонии пересейте на скошенный СПА, для выделения и накопления чистой культуры.

Задание №8

1. Проверьте однородность выделенной чистой культуры, зарисуйте мазок в дневник и с делайте заключение.

Заключение:

2. Наметьте ход дальнейшего бактериологического исследования для окончательной идентификации выделенной культуры. Учтите результаты всех тестов идентификации и сделайте заключение.

1.

Результат:

2.

Результат:

3.

Результат:

4.

Результат:

5.

Результат:

-

-

-

-

-

Заключение:

Оценка___________

Подпись преподавателя _____________