Занятие Тема: «Методы исследования мочи и отделяемого из урогенитального тракта».

Тема: «Методы исследования мочи и отделяемого из урогенитального тракта».

I.План занятия

1. Изучить этиологию оппортунистических инфекцийурогенитального тракта.

2. Изучить правила забора, хранения и транспортировки исследуемого материала при инфекциях урогенитального тракта.

3. Освоить методику выделения и идентификации предполагаемых возбудителей из биологического материала при инфекциях урогенитального тракта.

II. Самостоятельная работа

Задание 1

Изучите этиологию оппортунистических инфекций урогенитального тракта.

Оппортунистические инфекции урогенитального тракта протекают в виде гломерулонефрита, пиелонефрита, околопочечных абсцессов, цистита, простатита, уретрита, послеоперационной инфекции, в том числе связанной с пересадкой почек. Течение перечисленных локальных инфекций нередко осложняется уретральной лихорадкой, уросепсисом и иногда бактериальным шоком.

Длительное выделение с мочой больших количеств бактерий при отсутствии клинических проявлений обозначается как бессимптомная бактериурия.

В мочевую систему условно-патогенные бактерии проникают гематогенным путем, при травмах органов мочеполовой системы, при контакте с инфицированными органами малого таза и восходящим путем через уретру. Последний путь является главным. Он может быть результатом медицинских вмешательств или происходит самопроизвольно. Судьба проникших в мочеполовую систему условно-патогенных микробов зависит от инфицирующей дозы возбудителя и особенно от состояния местного и общего иммунитета. Категориями риска являются больные с врожденными пороками развития мочевой системы, почечнокаменной болезнью, инфекционными очагами в малом тазу, иммунодефицитами, медицинскими вмешательствами на мочеполовой системе.

Гломерулонефрит обычно вызывается нефрогенными штаммами Str. pyogenes, а также стафилококками.

Остальные уроинфекции вызываются главным образом грамотрицательными бактериями, прежде всего E. coli u Proteus, а также Kl. pneumoniae, Enterobacter, Citrobacter freundii, P.aeruginosa, S. epidermidis, St. aureus, Str. pyogenes, Str. faecalis, Bacteroides, Candida.Острые уроинфекции чаще всего вызываются одним видом, хронические и послеоперационные – ассоциацией возбудителей.

Микробиологическая диагностика оппортунистических инфекций урогенитального тракта основана на выделении культуры. Для отличия возбудителя уроинфекции от микробов – контаминантов и других этиологически незначимых видов используют количественный метод. Содержание выделенной культуры в количестве 10⁵-10⁶и больше особей в 1 мл мочи безусловно указывает на этиологическую роль выделенной культуры.

Задание 2

Изучите правила забора, хранения и транспортировки исследуемого материала при инфекциях урогенитального тракта.

ПРАВИЛА

ЗАБОРА МАТЕРИАЛА ДЛЯ БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Общие требования.

1. Биоматериал должен отбираться:

· до начала антибиотикотерапии терапии или перед введением следующей дозы антибиотика с учетом времени его элиминации;

· непосредственно из очага инфекций либо биопробы, отражающих процесс в тех или иных органах и системах (бронхиальный секрет при пневмониях, моча при инфекциях МВП и др.);

· с соблюдением асептики, избегая контаминации посторонней флорой;

· в достаточном количестве для проведения исследования и помещаться в стерильную посуду.

2. Доставляться в максимально короткие сроки (1,5-2 часа либо с применением транспортных сред).

3. Необходимо правильно заполнять сопроводительные документы (направления).

МОЧА

Показания для проведения микробиологического исследования:

·подозрение на воспалительные заболевания почек и мочевого пузыря.

Взятие исследуемого материала.

В стерильную посуду собирают среднюю порцию свободно выпущенной мочи в количестве 10-20 мл. Предпочтительно собирать утреннюю порцию мочи, т.к. за ночь концентрация бактерий в мочевом пузыре возрастает. Перед взятием материала больной должен совершить тщательный туалет наружных половых органов. Экспертами ВОЗпредложены следующие инструкции по сбору мочи для мужчин и женщин:

Для мужчин:

1.Тщательно вымыть руки.

2.Обнажить головку полового члена и выпустить небольшую порцию мочи.

3.Прервать мочеиспускание и выпустить порцию мочи в стерильную посуду.

4.Закрыть ее, избегая возможной контаминации, и передать в лабораторию.

Для женщин:

1.Тщательно вымыть руки.

2.Вымыть половые органы, используя стерильные марлевые салфетки и теплую мыльную воду, в направлении спереди назад.

3.Промыть половые органы еще раз теплой водой и вытереть стерильной салфеткой. На протяжении всей процедуры держать половые губы раздвинутыми и не касаться их пальцами.

4.Собрать среднюю порцию мочи в стерильную посуду.

5.Закрыть ее, избегая возможной контаминации, и передать в лабораторию.

Катетеризацию целесообразно использовать для сбора мочи только для уточнения локализации инфекции: в почках или в мочевом пузыре. Для этого мочевой пузырь опорожняют катетером, промывают раствором антисептика и через 10 минут забирают пробы мочи. При инфекциях мочевого пузыря моча остается стерильной.

При наличии постоянного катетера его наружное отверстие протирают 70^оспиртом, через отверстие собирают мочу шприцем с иглой и переносят в стерильную емкость.

Пробы мочи могут храниться до начала исследования не более 2 часов при комнатной температуре и не более суток в холодильнике, так как имеется риск размножения бактерий и искажения результатов исследования. При взятии мочи из катетера посев необходимо произвести не позднее 2 часов.

Оценка диагностической значимости полученных результатов.

В норме в мочевом пузыре моча стерильна, но во время прохождения через нижнюю треть уретры происходит ее контаминация нормальной микрофлорой. В связи с этим при оценке результатов исследования на первый план выходят количественные критерии, позволяющие дифференцировать бактериурию, связанную с патологическим процессом и естественное загрязнение. При этом используются следующие показатели:

- количество микроорганизмов, не превышающее 10³ клеток в 1 мл, свидетельствует о естественной контаминации мочи;

- обнаружение микроорганизмов в количестве от 10³ до 10⁵ клеток в 1 мл рассматривается как сомнительный результат и требует повторения исследования;

- обнаружение бактерий в количестве, превышающем 10⁵ клеток в 1 мл, свидетельствует о наличии воспалительного процесса.

В отдельных случаях воспалительные процессы в мочевыводящей системе могут протекать и при низких уровнях бактериурии. Это бывает на фоне форсированного диуреза (низкий удельный вес мочи), на фоне антибиотикотерапии, в сочетании с низкими значениями рН мочи. В этом случае постановке диагноза помогает анализ видового состава микрофлоры. Обнаружение эшерихий, протеев, синегнойной палочки, клебсиелл, - должно расцениваться как неблагоприятный признак. Находки дифтероидов,лактобацилл, грамположительных палочексвидетельствуют о загрязнении нормальной микрофлорой. Обнаружение монокультуры в сочетании с высокой степенью бактериурии характерны для острого воспалительного процесса, ассоциации микроорганизмов более характерны для хронических процессов. Три и более видов микроорганизмов выделенных в больших количествах указывают на загрязнение мочи во время забора или на неправильное ее хранение.

Задание 3

Проведите подготовку пробы мочи к бактериологическому исследованию.

Алгоритм подготовки пробы мочи:

1.Мерное количество поступившей в лабораторию пробы мочи (5 мл) центрифугируют при 8-10 тыс. об/мин 10-15 мин или при 5 тыс. об/мин 20-30 мин.

2.Надосадок сливают, из осадка делают мазки.

Задание 4

Проведите микроскопическое исследование осадка мочи, т.е. сделайте мазок, зафиксируйте, окрасьте по методу Грама-Синева, метиленовым синим, Романовскому – Гимзе, изучите под микроскопом, зарисуйте его в дневник и сделайте предварительное заключение.

Заключение:Заключение: Заключение:

Задание 5

Проведите определение степени бактериурии методом секторных посевов нативной пробы мочи.

Алгоритм определения степени бактериурии методом секторных посевов:

1.Определяют степень бактериурии – количество колониеобразующих единиц (КОЕ) в 1 мл мочи методом секторных посевов мочи.

2.Бактериологической петлей диаметром 2 мл (вместительностью 0,005 мл) производят посев мочи- 3-4 штриха на сектор чашки Петри с СПА.

3.После этого петлю прожигают и производят 4 штриховых посева из сектора А в сектор I и аналогичным образом из сектора II в сектор III(каждый раз прожигая петлю).

4.Чашки инкубируют при 37⁰С 18-24 часа.

5.После инкубации подсчитывают число колоний, выросших в разных секторах.

Рис. Схема посева мочи секторным методом.

А, I, II, III – последовательность посева мочи по секторам.

Определение степени бактериурии по количеству выделенных колоний производят согласно табл. 47.

Таблица 47. Определение степени бактериурии методом секторных посевов.

6.Колонии, выросшие на плотной питательной среде, отсевают в пробирки со скошенным агаром.

7.Выделенную чистую культуру идентифицируют и определяют ее чувствительность к антибактериальным препаратам.

8.Оценка результатов

Задание 6

Проведите II-ой этап бактериологического исследования уринокультуры, выделенной методом секторного посева на чашке Петри с СПА:

1.

2.

Заключение:

3.

Задание 7

Составьте алгоритм и проведите III-й этап бактериологического исследования выделенной чистой уринокультуры:

1.

Задание 8

Проведите учет и оценку результатов бактериологического исследования мочи и выпишите окончательный ответ (заключение).

1. Оценка степени бактериурии:

Количество колоний в секторах Количество бактерий в 1 мл мочи

А I II III

2.Результаты биохимического типирования уринокультуры:

3. Учет результатов пробы на чувствительность к антибиотикам:

-

-

-

-

-

Заключение:

Оценка___________

Подпись преподавателя ______________