Занятие ТЕМА: «Микробиологическая диагностика листериоза»

ТЕМА: «Микробиологическая диагностика листериоза»

I План занятия

1. Закрепить знания по изучению морфологии и физиологии листерий, методов лабораторной диагностики листериоза.

2.Изучить правила забора, хранения и транспортировки исследуемого материала при листериозе.

3. Овладеть методикой и техникой:

а) проведения I-ого этапа бактериологического исследования при листериозе;

б) постановки тестов идентификации листерий.

4. Закрепить практические навыки по технике микробиологических исследований.

II Практическая работа

Задание 1.

Приготовьте питательные среды, используемые для выделения и идентификации листерий:

1. 1% сахарный агар в объеме 200мл, расплавив стерильный СПА во флаконе на водяной бане и добавив с соблюдением асептики 0,05 мл 40% стерильного раствора глюкозы. Среду разлейте в стерильные чашки Петри.

2. Полужидкий агар с глюкозой в объеме 100мл.

Способ приготовления: в СПБ растворяют 0,5% глюкозы и 0,1% агар-агара или 0,4-0,5% питательного агара. Стерилизуют текучим паром 3 дня по 30 мин. Разлейте среду в стерильные пробирки столбиками высотой 5 см (1/4 часть пробирки).

3. Среды Гисса с Л, Гл, Мн, М, С по прописи на этикетках по 50 мл каждой среды и разлейте в пробирки столбиками, высотой 3-5 см.

4. Среду АГВ с глюкозой, расплавив стерильную среду во флаконе на водяной бане и добавив с соблюдением асептики 1г глюкозы. После охлаждения до 45-50⁰С разлейте в стерильные чашки Петри.

Задание 2.

Изучите морфологию и тинкториальные свойства листерий по таблицам и путем микроскопии музейных препаратов. Зарисуйте мазок в дневник и подпишите.

Задание 3.

I Изучите алгоритм проведения I-ого этапа бактериологического исследования материала (слизь из зева) при выделении листерий.

Алгоритм проведения I-ого этапа бактериологического исследования

при выделении листерий.

1. Из материала делают мазок, окрашивают по методу Грама-Синева, микроскопируют и дают предварительный ответ.

2. Материал засевают на плотные среды (глюкозный, глюкозо-печеночный, глюкозо-кровяной агар) и инкубируют при 37⁰С 24-48 часов.

3. Материал засевают в сахарный СПБ → 37⁰С 14-16 часов.

II Произведите забор материала (слизь из зева) при помощи стерильного кишечного тампона (друг у друга).

III Сделайте мазок-отпечаток с тампона, окрасьте по методу Грама-Синева, изучите под микроскопом, зарисуйте в дневник и сделайте предварительное заключение.

Заключение:

IV Сделайте посев материала на сахарный агар и поставьте чашки в термостат при 37⁰С 24 часа.

1

Техника посева клинических образцов на твердые питательные среды:

2 1 – посев тампоном

2, 3, 4 – посев петлей на секторы

4 3

V Тампон с материалом поместите в пробирку с сахарным бульоном (посев методом «опускания») → 37⁰С 14-16 часов.

Задание 4.

Проведите постановку тестов идентификации листерий, учтите результаты и сделайте заключение:

1. Проверьте однородность выделенной чистой культуры, сделайте мазок, окрасьте по методу Грама-Синева, изучите под микроскопом и сделайте заключение.

Заключение:

2. Поставьте с чистой культурой пробу на оксидазу при помощи СИБ на оксидазу.

Результат:

Заключение:

3. Поставьте с чистой культурой пробу на каталазу, учтите результат и сделайте заключение.

Алгоритм определения наличия у микроба каталазы:

1. Одну каплю перекиси водорода (3% раствор) наносят на предметное стекло.

2. Вносят в каплю перекиси водорода одну петлю испытуемой культуры и размешивают.

3. В присутствии каталазы образуются пузырьки водорода.

Результат:

Заключение:

4. Сделайте посев чистой культуры на короткий «пестрый» ряд Гисса и сахарный СПБ с двумя индикаторными бумажками при 37⁰С 24 часа.

Зарисуйте характер роста листерий на средах Гисса и сделайте заключение.

Заключение:

5. Сделайте посев чистой культуры в столбик полужидкого агара с глюкозой → 20-25⁰С 24 часа.

Результат:

Заключение:

6. Сделайте посев чистой культуры на среду с мочевиной 37⁰С 24 часа.

Результат:

Заключение:

7. Сделайте посев чистой культуры на среду с крахмалом → 37⁰С 24 часа.

Результат:

Заключение:

8. Поставьте пробу на чувствительность выделенного штамма к антибиотикам методом диффузии в агар с применением стандартных бумажных дисков → 37⁰С 24 часа.

Результат:

1.

2.

3.

4.

5.

9. Сделайте заключение по результатам поставленных тестов идентификации культуры (выпишите ответ).

Заключение:

Оценка ___________

Подпись преподавателя ______________