Занятие Тема: «Микробиологическая диагностика инфекций, вызванных бактероидами, пептококками, пептострептококками, вейллонеллами»

Тема:«Микробиологическая диагностика инфекций,

вызванных бактероидами, пептококками,

пептострептококками, вейллонеллами»

I План занятия

1. Закрепить знания по изучению морфологических и биологических свойств бактероидов, пептококков, пептострептококков и вейллонелл.

2. Изучить:

а) правила забора, хранения и транспортировки исследуемого материала при инфекциях вызванных анаэробными условно-патогенными бактериями;

б) методы микробиологической диагностики инфекций, вызванных бактероидами, пептококками, пептострептококками, вейллонеллами;

в) тесты идентификации анаэробных грам- и грам+ условно-патогенных бактерий.

3. Овладеть методикой и техникой посева исследуемого материала на питательные среды методом фракционирования с применением дисков, пропитанных антибиотиками.

4. Закрепить практические навыки по методикам приготовления питательных сред, используемых для выделения и идентификации анаэробов.

IIСамостоятельная работа

Задание 1.

Изучите правила забора и транспортировки материала при гнойно-воспалительных и гнойно-септических заболеваниях, обусловленных аспорогенными анаэробными микроорганизмами (см. Приложение 1).

Задание 2.

Приготовьте питательные среды, используемые при выделении АНГОБ:

1. Полужидкий агар в объеме 100мл (взяв навеску питательного агара 1,2г) по прописи на этикетке и разлейте в стерильные бактериальные пробирки высоким столбиком (до ½ объема пробирки).

2. Скошенный СПА

Способ приготовления: расплавьте стерильный агар во флаконе на водяной бане, охладите до 45-50⁰С, разлейте в стерильные бактериальные пробирки и скосите, пользуясь ШСА.

3. Молоко по Тукаеву в объеме 25 мл

Способ приготовления:

К 1% пептонной воде добавляют 5-6% обезжиренного молока, соблюдая стерильность. Среду разливают в бактериальные пробирки по 5мл.

4. Среду Вильсона-Блер по прописи на этикетке в объеме 50 мл, охладите до 45-50^оС и используйте для посева материала в бактериальные пробирки глубинным методом.

5. 1% сахарный бульон, добавив к 100мл стерильного СПБ 1г глюкозы, соблюдая стерильность и разлейте в стерильные бактериальные пробирки.

Задание 3.

Изучите по таблицам морфологические свойства грам- и грам+ анаэробных условно-патогенных бактерий, зарисуйте в дневник и подпишите.

Задание 4.

Проведите 1-ый этап бактериологического исследования для выделения АНГОБ (групповым способом).

Сделайте посевы материала («содержимое брюшной полости») на наличие анаэробной и аэробной микрофлоры; укажите среды и режимы инкубации посевов:

а) – для выявления анаэробной флоры:

1.

2.

3.

4.

5.

б) – для выявления аэробной флоры:

1.

2.

3.

в) одновременно делают посев на ……

Задание 5

1. Отработайте технику посева исследуемого материала на питательные среды методом фракционирования с применением дисков, пропитанных антибиотиками.

Этот посев используют для предварительной индикации анаэробов и дифференциации с факультативными анаэробами при первичном высеве материала на НКА.

Большинство АНГОБ характеризуется чувствительностью к метронидазолу (трихопол) и резистентнотью к гентамицину.

Колонии АНГОБ обычно растут вблизи диска с гентамицином и отсутствуют в зоне метронидазольного диска.

Факультативные анаэробы растут у диска с метронидазолом, а гентамицин вызывает обычно образование более или менее выраженных зон ингибиции их роста.

Алгоритм

посева исследуемого материала на питательные среды методом франционирования

с применением дисков, пропитанных антибиотиками.

1. С целью экономного использования чашек с НКА, высевы можно делать не на целую чашку, а на сектора, применяя ограничитель посевов. Это приспособление изготавливается из проволоки (диаметр примерно 1,5мм) в виде замкнутой петли, имеющей форму сектора (около ¼ площади чашки Петри) и перпендикулярно расположенной проволочной ручки. Стерилизуется ограничитель прожиганием над пламенем спиртовки.

Надавливая петлей на агар с помощью ручки, на поверхности НКА можно выделить 4 сектора, ограниченные друг от друга двумя параллельными рядами канавок, предохраняющих последующие посевы на секторах от слияния.

2. Высев на сектор НКА делают пастеровской пипеткой, путем нанесения 1-2 капель материала и распределения его сплошным слоем по поверхности среды петлей или шпателем (небольшого размера).

3. На засеянную поверхность НКА накладывают диски с метронидазолом (5 мкг/диск) гентамицином (10 мкг/диск, фабричные).

4. Чашки помещают в микроанаэростат (до 6 чашек с посевами) крышками вверх, и герметично его закрывают. Затем насосом откачивают воздух до «-1» (по показаниям манометра) и заполняют бескислородным газом до отметки «О», повторив эту процедуру 2-3 раза, заполненный газом микроанаэростат ставят в термостат.

5. Первичные посевы просматривают через 2 суток и далее каждые 1-2 дня, всего, продол-жительность инкубации, при отсутствии роста анаэробов, должна составлять не менее 5-7 дней.

Внимание! Все манипуляции: посевы, просмотр чашек и отбор подозрительных колоний, необходимо производить как можно быстрее, для сокращения контакта микроорганизмов с кислородом воздуха.

2. Учтите полученные результаты посевов и сделайте заключение.

Результат:

Заключение:

Задание 6.

Сделайте из исследуемого материала нативный препарат «раздавленная капля» и препарат, окрашенный по Граму.

Проведите микроскопию обоих препаратов, зарисуйте в дневник и сделайте заключение:

Заключение:Заключение:

Задание 7

Изучите нормативные документы, регламентирующие микробиологическую диагностику заболеваний, вызываемых анаэробными условно-патогенными микроорганизмами:

vМетодические рекомендации «Выделение и идентификация анаэробных неспорообра-зующих грамотрицательных бактерий-возбудителей хирургических инфекций» от 20.03.98г.

Оценка ___________

Подпись преподавателя ______________

Приложение 1

правила

забора и транспортировки материала при гнойно-воспалительных и гнойно-септических заболеваниях, обусловленных аспорогенными анаэробными микроорганизмами

Исследуемый материал

Материалом при бактериологическом исследовании аспорогенных анаэробых микроорганизмов служит: содержимое брюшной, плевральной полостей, ликвор, синовиальная суставная жидкость, кровь, экссудаты, гной, собранный пункцией полостей и органов, отделяемое из глубины раны, ткани, полученные при биопсии или оперативных вмешательствах.

Правила забора материала

Успешная диагностика заболеваний, вызванных аспорогенными анаэробными микроорганизмами зависит от соблюдения следующих правил забора материала для исследования:

1.забор материала необходимо проводить до начала антибактериальной терапии, т.к. это может вызвать изменение микробного пейзажа очагов инфекции;

2.необходимо избегать контаминации материала посторонней флорой;

3.предпочтительной методикой забора материала является прямая пункция пораженного очага или непосредственное изъятия пораженных тканей;

4.для исследования непригодны пробы: взятые с поверхности раны или вскрывшегося абсцесса; пораженные ткани, контаминизированные нормальной флорой дренажи, контактировавшие с кишечным содержимым. При, исследования трупного материала, кроме участков очага инфекции, берут: перикардинальную, трахеальную, перитониальную жидкость, кровь. Указанный материал забирают в количестве 10-15мл. Кроме того, исследуют кусочки печени, селезенки (10-20г), брыжеечные узлы, содержимое желудка и кишечника (100-200г). Необходимо соблюдать правила стерильного забора трупного материала.

Транспортировка материала в лабораторию

Оптимальным условием для выделения анаэробных аспорогенных бактерий является посев материала на питательные среды непосредственно у постели больного или доставка его в лабораторию в герметических контейнерах, заполненных газовой смесью без кислорода. Однако, это не всегда возможно.

Транспортировку материала в лабораторию осуществляют с соблюдением следующих обязательных условий:

vне допускается длительный контакт с воздухом материала, взятого от больного (включая транспортировку);

vматериал в лабораторию следует доставлять в максимально короткий срок (1-2 часа). По телефону бак лаборатория предупреждается о направлении материала на исследование;

vплотный материал транспортируют во флаконах или пробирках, закрытых резиновыми пробками и заложенных транспортной средой (среда наливается на 3/4 объема флакона);

vжидкий материал может быть доставлен в лабораторию в шприце, из которого удален воздух после взятия материала, а игла вкалывается в резиновую пробку;

vдля забора материала могут быть использованы тампоны. Материал, забранный тампоном, сразу же погружается в питательную среду или используются тампоны, предварительно пропитанные раствором, состоящим из 10% лизированной крови и 90% ИХН или 10% лизированной крови, 10% глицерина и 80% ИХН. Эти растворы перед употреблением стерилизуют автоклавированием при 1 атм. 20 мин.

При поступлении материала в лабораторию, в первую очередь, обрабатываются пробы, доставленные в шприцах, тампонах, пробирках, которые не содержат питательных сред, а затем остальные.