Главная Контакты В избранное
  • Занятие Тема: «Микробиологическая диагностика боррелиозов и лептоспирозов».

    АвторАвтор: student  Опубликовано: 4-12-2020, 20:14  Комментариев: (0)


    Тема: «Микробиологическая диагностика боррелиозов и лептоспирозов».

    I План занятия

    1. Закрепить знания по изучению морфологии и биологии боррелий и лептоспир и методов лабораторной диагностики возвратных тифов и лептоспирозов.

    2. Изучите правила забора хранения и транспортировки материала при боррелиозах и лептоспирозах.

    3. Овладеть методикой и техникой проведения микроскопического метода исследования при данных заболеваниях.

    4. Изучить методику постановки РМАЛ.

    IIСамостоятельная работа

    Задание 1.

    Изучите правила забора хранения и транспортировки материала при боррелиозах и лептоспирозах (см. рекомендации по забору материала на бактериологические исследования разработанные зам. глав. врача по эпидемиологии ГУ «ГОЦ ГЭ и ОЗ» Шерендо Я. М.)

    Задание 2.

    Изучите морфологию и тинкториальные свойства боррелий и лептоспир по таблицам, зарисуйте мазки в дневник и подпишите.

     

     

     

    Задание 3.

    Заполните таблицу, указав особенности морфологии, характер движения, культуральные свойства боррелий и лептоспир:

    Вид микроорганизма

    Особенности морфологии и характер движения

    Культуральные свойства

    B. recurrentis

    B. caucasica

     

     

    L. icterogenes

     

     

     

    Задание 4.

    Сделайте мазок из зубного налета, зафиксируйте и окрасьте по методу Романовского-Гимзы. Изучите под микроскопом сапрофитические формы спирохет (В.buccalis, Tr. microdentium), зарисуйте мазок в дневник и подпишите.

     

     

     

    Задание 5.

    Проведите микроскопическое исследование крови с целью обнаружения боррелий:

    1. Сделайте мазок крови, подсушите, зафиксируйте и окрасьте разведенным водой фуксином (1:2).Зарисуйте и сделайте заключение по результатам микроскопического исследования.

    Заключение:

     

     

     

    2. Сделайте препарат крови «толстая капля» и окрасьте его по методу Романовского-Гимзы.

    АЛГОРИТМ ОКРАСКИ ПО РОМАНОВСКОМУ-ГИНЗЫ:

    1. На предметном стекле готовят мазок из крови несколько толще обычного. Затем на мазок, пока он влажный (!), наносят каплю крови.

    2. Внимание! Толстые капли крови перед окраской не фиксируют!

    3. На высохшую нефиксированную каплю наливают около 0,5 мл краски Романовского-Гимзы (1 капля красителя на 1 мл дистиллированной воды нейтральной реакции).

    4. Через несколько минут в капле появляется облачко гемоглобина, краску сливают и наливают новую порцию ее. Окрашивают в течение 20-30 мин.

    5. Затем осторожно промывают водой, (помнить, что капля не фиксирована), высушивают и микроскопируют с иммерсионной системой.

    III. Изучите мазок под микроскопом, зарисуйте в дневник и сделайте заключение по данным микроскопического исследования.

    Примечание: Отсутствие боррелий в препарате не позволяет при характерной клинической картине исключить диагноз возвратного тифа; требуются повторные исследования на высоте лихорадочного периода.

    Заключение:

     

     

    Задание 6.

    1. Изучите методику и технику постановки РМАЛ.

    Назначение – идентификация и определение серогрупп лептоспир, выделенных от человека и животных, из внешней среды, контроль серологических свойств производственных штаммов лептоспир.

    АЛГОРИТМ ПОСТАНОВКИ РМАЛ.

    1. В ампулу с сывороткой наливают 1 мл стерильного ИХН. После полного растворения препарата в течение 3 мин., сыворотку разводят 1:10, делают последовательное 10-ти кратное разведение до 1:10000, затем, несколько разведений до титра сыворотки, указанного на этикетке.

    2. По 0,2 мл разведений сыворотки переносят в лунки полистероловых пластин (пробирок), добавляют по 0,2 мл живой культуры лептоспир, выращенной на среде Терских при температуре 280 +-10С в течение 14-12 дней и содержащий 80% лептоспир в поле зрения микроскопа (х400).

    3. Одновременно проводят контроль антигена:

    в одну лунку (пробирку) вносят 0,2 мл стерильного ИХН и добавляют в нее 0,2 мл живой культуры гомологичного штамма лептоспир.

    4. Пластину (пробирку) со смесями ставят на 2 часа при температуре 220С, или на 1 час при температуре 280С, или на 30 минут при температуре 370С.

    5.Учет результатов:

    из каждой лунки (пробирки), включая контроль по 1 капле смеси наносят с помощью пипетки Пастера на предметное стекло, накрывают покровным стеклом и микроскопируют (х400) в темном поле зрения.

    Сначала подсчитывают количество лептоспир в контрольных лунках, затем в опытных.

    Степень реакции определяют по количеству лизированных иагглютинированных лептоспир и выражают в плюсах:

    (+) – агглютинировано не менее 25 % лептоспир;

    (++) - агглютинировано не менее 75 % лептоспир;

    (+++) - агглютинировано не менее 100 % лептоспир.

    Реакция в контролях должна отсутствовать.

    Испытуемую культуру, выделенную от людей, животных или из объектов внешней среды, можно отнести к какой либо серогруппе лептоспир, если анализируется и агглютинируется этой сывороткой, разведенной не менее, чем 1:10000.

    6. Изучите по таблице и зарисуйте вид реакции агглютинации и лизиса лептоспир.

     

     

     

     

     

    Оценка _____________

    Подпись преподавателя_____________

    скачать dle 10.6фильмы бесплатно