Лекция Тема: « Возбудители спирохетозов. Трепонема сифилиса»

Лекция № 33

Тема 2.11.1: « Возбудители спирохетозов. Трепонема сифилиса»

План

1. Общая характеристика спирохет. Таксономия возбудителя сифилиса.

2. Морфология и биологические свойства, культивирование.

3. Культуральные и тканевые трепонемы.

4. Патогенез и клиника сифилиса. Особенности иммунитета.

5.Лечение и профилактика сифилиса.

Трепонема сифилиса

Общая характеристика возбудителей спирохетозов.

Спирохеты – Spirochaeta (speira – изгиб, виток,chaite - волосы) – спирально извитые, очень тонкие, обладающие активной подвижностью бактерии, включенные в семейство Spirochaetaсеае и Leptospiraceae порядка Spirochaetales.

Снаружи спирохеты покрыты многослойной наружной мембраной, под которой расположен протоплазматический цилиндр с цитоплазмой, окруженной цитоплазматической мембраной и клеточной стенкой. Спирально закрученный протоплазматический цилиндр обвит периплазматическими жгутиками. Они являются локомоторными органеллами спирохет и отличаются от жгутиков других бактерий, поскольку полностью локализованы внутри клетки и обвиты вокруг нее. Это дает возможность спирохетам плавно и целенаправленно передвигаться вследствие выраженной гибкости их тела, хотя жгутиков как у других бактерий у них нет. Спор и капсул спирохеты не образуют. Размножаются поперечным делением.

Спирохеты – аэробы или факультативные анаэробы, хемоорганатрофы. По биологическим свойствам спирохеты занимают промежуточное положение между бактериями и простейшими.

Спирохеты являются грамотрицательными бактериями. Однако окраской по Граму не пользуются , поскольку спирохеты плохо воспринимают анилиновые красители. Их, так же как простейших, окрашивают по методу Романовского – Гимзы, который для спирохет является дифференциальным, а именно: трепонема сифилиса окрашивается в бледно-розовый цвет, боррелии – в сине-фиолетовый, лептоспиры – в розовый, а спирохеты – сапрофиты – в синий цвет.

Кроме того, для выявления спирохет используют нативные препараты "раздавленная ” и "висячая” капля, которые микроскопируют в темнопольном или фазово-контрастном микроскопе. В этих препаратах спирохеты дифференцируют по характеру движения.

В окрашенных мазках спирохеты различаются по количеству и форме завитков, длине и толщине нити, а также по тинкториальным свойствам.

К группе спирохет относятся семь родов, из которых три играют существенную роль в инфекционной патологии человека. Это роды - Treponema, Borrelia, Leptospira.

Таксономия трепонем

Трепонема (Treponema) – род спиралевидно извитых нитевидных эластичных аспорогенных подвижных грамотрицательных хемоорганотрофных бактерий из семейства Spirochaetaсеае порядка Spirochaetales.

К облигатно-патогенным для человека трепонемам относятся :

1) T.pallidum –возбудитель сифилиса.

2) T. pertenue – возбудитель фрамбезии.

3) T. carateum – возбудитель пинты.

Условно – патогенные и, вероятно, непатогенные для человека трепонемы обитают главным образом в полости рта и гениталиях. Это: T.phagodenus, T.makrodentium, T. denticola, T.orale, T.scoliodontum, T.refringens, T.vincentii.

Последний вид вместе с Fusitormis вызывают у человека язвенно –некротические процессы, называемые фузоспирохетозом.Остальные виды, по мнению ряда исследователей, принимают участие в развитии анаэробных процессов полости рта.

Возбудитель сифилиса Treponema pallidumпринадлежит к роду Treponema, семейству Spirochaetaсеае, порядка Spirochaetales. Открыта Ф.Шаудином и Э.Гофманом в 1905г.

Морфология и биологические свойства бледной трепонемы

Морфология

T.pallidumимеет форму спирали или пружинки с 8-14-17 мелкими равномерными завитками. Длина ее составляет 6-12мкм, а в поперечнике – около 0,2мкм. Спор и капсул не образует, жгутиков не имеет. Есть данные о наличии L-форм бледных трепонем. При реверсии в исходную спиралевидную форму L-формы проходят в организме человека стадию цист.

Обычно цисты образуются под влиянием факторов внешней среды и лечебных препаратов, при этом трепонемы свертываются в клубки, покрытые муциноподобной оболочкой, т.е. цисты. Цисты длительное время могут находиться в организме больного в латентном состоянии, при благоприятных условиях цисты превращаются в зерна, а затем в типичные спиралевидные трепонемы. Т.о цистообразование– одна из защитных форм трепонем, позволяющая им противостоять действию препаратов, применяемых для лечения больных сифилисом.

T.pallidum - грамотрицательна, окрашивается по Романовскому-Гимзе в бледно-розовый цвет, что объясняется скудностью содержания нуклеопротеидов в их теле. Плохо воспринимает анилиновые красители.

Для T.pallidumхарактерно медленное плавное маятникообразное раскачивание и плавное сгибание и разгибание под углом.

Культивирование.

Бледная трепонема – облигатный анаэроб. Оптимальная температура -

35-37 ⁰C, границы роста - 34-40⁰C. Это весьма требовательный микроорганизм, на обычных средах не растет.

Для выращивания используют асцитическую жидкость с кусочками мозга или почек кролика, кроличью сыворотку с кусочками мозговой ткани; пробирки с этими средами заливают слоем вазелинового масла. Растут в столбике полусвернутой лошадиной сыворотки, в глубине асцитического агара со свежей тканью кролика. Апробированы плотные среды, содержащие экстракт куриного эмбриона на соевой основе. Хорошо она развивается на хорионаллантоисной оболочке куриного эмбриона.

Выросшие на средах, культуральные трепонемы утрачивают характерную форму, а главное, - иммуногенность и патогенность.

Получение чистых культур трепонем представляет большие трудности, они не дают видимых признаков роста, поэтому трепонемы сохраняются путем пассажей на кроликах (первоначально заражают животных кашицей сифилитической ткани больных людей под кожу мошонки или в паренхиму яичка, затем – материалом зараженного кролика), их называют тканевыми трепонемами.

Тканевые трепонемы, в отличие от культуральных трепонем, сохраняют все биологические свойства. Тканевые трепонемы яичка кролика с сифилитическим орхитом используют для получения специфического трепонемного антигена, который используют для постановки реакции Вассермана при серодиагностике сифилиса.

Антигенная структура

Антигенная активность выражена слабо и связана с полисахаридом осевой нити с липопротеидами и белками оболочки. Характеризуется широкими антигенными связями с другими трепонемами, особенно возбудителями пинты, а также с липоидными экстрактами тканей животных и человека (липоидный экстракт бычьего сердца). Серологические варианты не установлены.

Резистентность.

T.pallidum высоко чувствительна к высыханию , высокой

t⁰ (при 40-48⁰C она инактивируется), свету, солям ртути, висмута, мышьяка, бензилпенициллину, кислотам, спирту, дезинфекционным средствам. Хорошо переносит низкие t⁰ - при -78⁰C сохраняется до 1 года.

В пробах цельной крови и сыворотке при 4⁰C остается жизнеспособной более суток, что имеет эпидемическое значение.

Эпидемиология, патогенез, клиника сифилиса и особенности иммунитета

Сифилис– первично-хроническое инфекционноевенерическое заболевание человека, обусловленное T.pallidum.

В естественных условиях возбудитель сифилиса патогенен только для человека. В эксперименте процесс возникает у кроликов (в яичке и коже) и человекообразных обезьян (в коже).

Источник инфекции – больной человек!

Пути передачи заразного начала:

- контактный, преимущественно половой, реже бытовой (постель,

посуда и др.)

- через плаценту, внутриутробный (врожденный сифилис)

- возможно заражение через поцелуи, молоко кормящей матери

- не исключены случаи зараженияпри переливании крови от доноров, больных сифилисом.

Патогенез и клиническая картина

Возбудитель сифилиса проникает в организм через кожу или слизистую оболочку, распространяется по органам и тканям, вызывая их поражение.

Инкубационный период длится в среднем 3-4 недели (может длиться от10 до 90 дней).

После инкубационного периода сифилис протекает циклически в виде первичного, вторичного, третичного и четвертичного периодов.

Первичный сифилис

В месте внедрения возбудителя (на половых органах, губе и т.д.) появляется первичная сифилома в виде плотного инфильтрата с поверхностной эрозией или язвой. Дно и края язвы имеют хрящеподобную консистенцию (откуда и название "ulcus durum” - "твердый шанкр”). Серозное отделяемое язвы сохраняет большое количество трепонем. Первичной сифиломе сопутствует возникновение регионарного аденита в виде увеличенных плотных лимфоузлов. Эта стадия длится около 6 недель.

Вторичный сифилис

Наступает через 2-3 месяца и характеризуется высыпаниями на коже и слизистых оболочках в виде розеол, папул, везикул и пустул, в которых обнаруживаются бледные трепонемы, а также развитием специфических процессов во внутренних органах, костной ткани, периферической и ЦНС.

Длится вторичный сифилис 3-4 года. Он сопровождается выработкой Ат – JgG и JgM (серопозитивный период).

Третичный сифилис

Характеризуется образованием в коже, подкожной клетчатке, внутренних органах, костях, ЦНС папул, бугорков, гумм или гуммозных инфильтратов, склонных к распаду, изъязвлению, после рубцевания обезображивает органы и нарушает их функции. Сифилитические гуммы асептичны и являются следствием выработки аллергических JgE. Этот период продолжается несколько лет (десятки). Может протекать в активной и скрытой формах. Пролиферативно-деструктивные процессы сопровождаются нарастающим антителообразованием.

У некоторых лиц спустя десятки лет после заражения наступает поражение ЦНС (нейросифилис), характеризующийся развитием прогрессивного паралича и спинной сухотки. Развивается паралич нижних конечностей и нарушение функций тазовых органов. В ликворе легко выявляется повышенный титр специфических Ат.

Перенесенное заболевание как у мужчин, так и у женщин ведет к бесплодию.

Иммунитет

При сифилисе формируется инфекционный (нестерильный) иммунитет, т.е. состояние невосприимчивости к возбудителю сохраняется до тех пор, пока он находится в организме. Перенесение болезни сопровождается выработкой 2-х видов Ат: неспецифических (реагинов) и специфических (противотрепонемных).Реагины не обладают защитным действием. Специфические Ат вырабатываются под влиянием протеинов антигенов возбудителя. Т.о. иммунитет при сифилисе является инфекционным и характеризуется клеточными защитными реакциями, обуславливающими образование гранулемы и фиксацию трепонем. Выздоровевшие могут вторично заразиться и заболеть.

Микробиологическая диагностика сифилиса

Материал для исследования: при первичном сифилисе материалом для исследования является отделяемое твердого шанкра и пунктат лимфатических узлов; при вторичном сифилисе – отделяемое слизистых и кожных поражений;во II, III и IV периодах сифилиса материалом являются сыворотка крови, плазма, спинномозговая жидкость.

При микробиологической диагностике сифилиса применяются микроскопические и серологические методы исследования.

Самым надежным методом микробиологической диагностики сифилиса является обнаружение возбудителя в экссудате или тканевой жидкости из твердого шанкра.

Для этого готовят:

Препарат "раздавленная капля” и рассматривают в темном поле зрения, основной дифференциальный признак – это характер движения, при обнаружении трепонемы дают ответ (возбудитель обнаруживается в 100% случаев). Тушевый мазок сейчас не используют.

Иммунофлюоресцентный метод состоит в обработке мазка из тканевой жидкости или экссудата меченой флюоресцентом противотрепонемной сывороткой и микроскопии его в люминисцентном микроскопе. Выявляются

типичные спирохеты со светящейся оболочкой.

Микроскопия в темном поле и РИФ могут дать положительные результаты и в нелеченных случаях вторичного сифилиса.

Серологический метод позволяет поставить диагноз сифилиса, начиная со 2-4-й недели во все периоды болезни, в том числе в латентную фазу.

Для серодиагностики сифилиса применяют :

1. Реакция Вассермана - это качественная РСК, ее проводят с использованием обычной техники, но в одном разведении сыворотки 1:5, в общем объёме 2,5мл, но сразу с двумя Аг – неспецифическим кардиолипиновым Аг для РСК и специфическим трепонемным Аг. Обязателен контроль сыворотки (без Аг) и 3 контроля с заведомо положительной, заведомо слабоположительной и заведомо отрицательной сыворотками.

Результат опыта оценивают как отрицательный, слабоположительный, положительный (сравнивают с контролями сывороток).

Во 2-ом и 3-ем периодах сифилиса RW положительная в 75-90% (серопозитивный сифилис). У новорожденных и грудных детей, больных сифилисом, она отрицательная, у детей с врожденным сифилисом она становится положительной только через 2-3 месяца после рождения.

RW (в совокупности с клиническими данными и осадочными реакциями)

служит методом контроля за качеством лечения. После лечения больных с I и II сифилисом она становится отрицательной через 1,5-2 месяца. При III сифилисе она может длительно (1-1,5 года и более) оставаться положительной.

Реакция Вассермана может быть положительной (неспецифической) при беременности , начиная с 8-го месяца, и после родов, при малярии, туберкулезе, некоторых вирусных и протозойных заболеваниях, лепре, лептоспирозе, новообразованиях, при менструациях, после наркоза, употребления накануне взятия крови спиртных напитков, жирной пищи, лекарств, введении чужеродных сывороток.

Неспецифические положительные RW при повторных исследованиях, которые производят двукратно или троекратно через 10-15 дней, становятся отрицательными.

2. Реакция микропреципитации с кардиолипиновым антигеном для постановки реакции микропреципитации (методику ее постановки будем изучать на практическом занятии).

3. Количественная РСК – проводится по общей схеме постановки РСК.

4. Из реакций флокуляции (осадочных) ВОЗ рекомендует VDRL(ВДРЛ) – реакция, техника проведения которой заключается в следующем: к каплям цельной или разведенной 1:2, 1:4 и т.д. инактивированной сыворотки обследуемого на предметном стекле добавляют по капле диагностикума из 0,03% кардиолипина , 0,9% холестерина и 0,21% лецитина. Стекло покачивают при комнатной температуре 4-5 мин. Присутствие реагинов в сыворотке вызывает видимую простым глазом флокуляцию. Реакцию оценивают как стандартную и специфическую.

Из современных реакций с Аг из бледной трепонемы рекомендуют реакцию гемагглютинации с бледными трепонемами (ТРНА) и ее микровариант,РИФ – адсорбции со взвесью T.pallidum из яичка кроликов (FTA-ABS),реакцию гемадсорбции в твердой фазе (JgM-SPHA). Все эти реакции оценивают как высокоспецифичные, чувствительные и экономичные.

Реакцию иммобилизации трепонем (РИТ), несмотря на специфичность, в связи с трудоемкостью постановки к применению в широкой практике не рекомендуют (методику см. стр.568 учебника С.А.Павловича, 2005г.)

РИТ- (тест Вильсона - Майера) – принцип в том, что сыворотка больного сифилисом в присутствии комплемента угнетает движение бледных трепонем. Последние получают из яичка кролика, пораженного специфическим орхитом. Яичко размельчают в специальной среде, в которой трепонемы сохраняют свою подвижность. РИТ обладает высокой чувствительностью и остается положительной после выздоровления больного.

Лечение и профилактика сифилиса

Средства специфической терапии:

- антибиотики (бициллин – 1, 3, 5 и другие антибиотики широкого спектра действия);

- препараты висмута (бийохинол, бисмоверол, пентабисмол);

- производные йода (йодид калия, йодид натрия, кальцийодин);

- аутогемотерапия

- биогенные стимуляторы иммунитета.

Средства специфической профилактики:не разработаны.

Борьба с сифилисом в РБ

Принципы и методы профилактики сифилиса, который относится к так, называемым социальным болезням, общие для всех венерических заболеваний.

Общественная профилактика основана на законодательных мероприятиях и диспансерных методах обслуживания населения. Она заключается в обязательном и бесплатном лечении заболевших, обследовании членов семьи заболевшего, выявлении источника заражения, профилактических осмотрах определенных групп рабочих и служащих, это прежде всего работников сферы обслуживания.

Исключительно важное значение имеет борьба с половой распущенностью.

В нашей стране достигнуты определенные успехи в борьбе с вензаболеваниями (это связано с хорошими условиями быта, отсутствием безработицы, равноправием женщин, отсутствием проституции).

НДД:

1.Приказ № 138 от 20.07.1993 "О совершенствовании работы кожно – венерологической службы РБ”

2.Приказ № 123от 07.07.1992 "О повышении роли гигиенического обучения и воспитания и формирование здорового образа жизни населения РБ.”